RECOGNIZER规范检测流程包含样本裂解、一步法信号扩增和微流控芯片读取,仅需25分钟就可以完成四种不同呼吸道病毒的同步检测。
使用滚环扩增技能组成的DNFs出现花状结构,均匀粒径约为1 μm,贮存200天后依然保持安稳。
使用化学耦连将hCG蛋白标记在核酸探针上,并与DNFs杂交成功制备hCG-DNFs。相较于其他捕获技能(如hCG-RCA,hCG-beads等),hCG-DNFs显着提高hCG捕获功率,且具有更高的CRISPR切开功率,信噪比超10倍。进一步构建四通道微流控芯片,可最低检测到0.1 nM的新冠核酸样本。
进一步对影响链置换和CRISPR切开反响的重要的条件(如DNFs杂交份额、序列规划、缓冲液浓度、反响时间等),以到达最佳检测灵敏度。
在优化的反响条件下,体系地验证了RECOGNIZER的检测功能。RECOGNIZER对核酸片段的最低检出限达5.42 皮摩尔。使用等温扩增对病毒颗粒进行预扩增,RECOGNIZER可最低检测到10复制/微升的病毒颗粒,满意大规模筛查需求。与此同时,RECOGNIZER具有较高的特异性、可重复性和安稳才能。50例临床样本检测成果准确率达100%。
为拓宽RECOGNIZER检测场景,研发高通量呼吸道病毒检测芯片及读取应用软件,仅需简略的加样、扫描过程,就可以完成4种不同呼吸道病毒(新冠病毒、中东呼吸体系综合征冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒)的同步检测,最低检出限别离到达5.42 皮摩尔、5.85皮摩尔、4.38 皮摩尔和6.34皮摩尔。
综上所述,本研讨以商业妊娠试纸为读取载体,构建了快速、可编程、超敏的高通量呼吸道病毒查验测验渠道,极大地简化了商业试纸条开发流程。